Jak provádět sériové ředění

Obsah

• stupně
• Metoda 1 Proveďte jednoduché ředění
• Metoda 2 Vypočítejte konečný ředicí faktor a koncentraci

V chemii ředění spočívá ve snížení koncentrace daného roztoku. Sériové ředění je jednoduše opakované ředění původního roztoku pro rychlé zesílení ředicího faktoru. Tento typ ředění se často provádí během experimentů vyžadujících vysoce zředěné roztoky a vysokou přesnost, jako jsou roztoky zahrnující křivky koncentrace na stupnici log nebo ty, které umožňují vypočítat hustotu bakterií v určitém médiu. Jsou velmi často prováděny v biochemii, mikrobiologii, farmakologii nebo chemii.

stupně

Metoda 1 Proveďte jednoduché ředění

1. 
   

   
   Určete správnou ředicí tekutinu (nebo ředidlo). Volba ředidla je velmi důležitá a závisí na roztoku, který chcete ředit. Ředidlo je často destilovaná voda, ale není systematické. V případě roztoku obsahujícího bakterie nebo buňky se tedy místo toho použije kultivační médium. Pro sériové ředění se ve všech zkumavkách používá stejné ředidlo.
   • Pokud si nejste jisti, které ředidlo použít, vyhledejte pomoc od kompetentní osoby nebo se podívejte na internet, co lidé musí udělat pro podobný zážitek.

2. 
   

   
   Připraví se několik zkumavek obsahujících 9 ml ředicí kapaliny. Tyto zkumavky se použijí pro postupné ředění. Princip je jednoduchý, odeberete vzorek výchozího roztoku a přenesete jej do další zkumavky, poté odeberete vzorek této zkumavky a vložíte ji do další, atd.
   • Před zahájením ředění je vhodné předem identifikovat zkumavky, aby nedošlo k záměně později.
   • V každé zkumavce budete mít koncentraci o deset nižší než v předchozí. První zkumavka bude obsahovat zředěný roztok v desáté, druhé, stoté, třetí, tisícině atd. Předem určete počet ředění, abyste předešli výrobě více zkumavek, než je nutné, a zbytečně ředidla odpadu.

3. 
   

   
   
   
   Připravte si zkumavku s matečným roztokem. Vložte alespoň 2 ml. Minimální množství zásobního roztoku pro sériové ředění je jeden mililitr. Nechte 2 ml pro případné druhé ředění. Tuto trubici mateřského roztoku můžete označit jako „SM“.
   • Před zahájením sériového ředění dobře promíchejte výchozí roztok.

4. 
   

   
   Proveďte první ředění. Napipetujte 1 ml zásobního roztoku do zkumavky označené „SM“ a převeďte toto množství do označené zkumavky. 1/10 který již obsahuje 9 ml ředicí kapaliny. Smícháním získáte homogenní roztok. V této zkumavce je nyní 10 ml roztoku: 1 ml zásobního roztoku a 9 ml ředicí kapaliny. Toto nové řešení je desetkrát méně koncentrované než předchozí řešení.

5. 
   

   
   
   
   Proveďte druhé ředění. Ve druhém sériovém ředění natáhnete 1 ml značeného roztoku zkumavky 1/10 a vyliješ to do zkumavky 1/100 který již obsahuje 9 ml ředicí kapaliny. Trubice 1/10 před vzorkováním bude dobře promíchán. Po dokončení přenosu zkumavku dobře promíchejte 1/100, Roztok z označené zkumavky 1/10 je 10krát koncentrovanější než u označené zkumavky 1/100.

6. 
   

   
   V případě potřeby tuto manipulaci opakujte. Tento postup lze opakovat tolikrát, kolikrát je třeba, dokud není dosaženo požadovaného zředění. Pro experiment zahrnující koncentrační křivky tak můžete získat řadu roztoků s ředěním na jednotku, desátou (1/10), setinu (1/100) nebo tisícinu (1/1000).

Metoda 2 Vypočítejte konečný ředicí faktor a koncentraci

1. 
   

   
   Vypočítejte poměr konečné ředění po sériovém ředění. Celkový poměr ředění se získá vynásobením ředicího faktoru tolikrát, kolikrát se vyskytuje ředění. Matematicky je tento vzorec následující: D_T = D₁ x D₂ x D₃ x ... x D_ns D_T představující celkový ředicí faktor a D_n, poměr ředění.
   • Předpokládejme tedy, že čtyřikrát za sebou provedete ředění tekutiny 1/10. Ve vzorci nahraďte ředicí faktor jeho hodnotou: D_T = 10 x 10 x 10 x 10 = 10 000
   • Konečný faktor ředění čtvrté zkumavky v sériovém ředění je 1/10 000. Koncentrace roztoku poslední zkumavky je nyní 10 000krát nižší než koncentrace původního roztoku.

2. 
   

   
   Po zředění se stanoví koncentrace roztoku. K nalezení konečné koncentrace roztoku po sériovém zředění potřebujete znát počáteční koncentraci. Vzorec je pak: C_{závěrečný} = C_{počáteční}/ As C_{závěrečný} představující konečnou koncentraci zředěného roztoku, C_{počáteční}, koncentrace zásobního roztoku a D, poměr ředění stanoveného předem.
   • Pokud tedy zředíte buněčný roztok koncentrací 1 000 000 buněk na ml a váš ředicí poměr byl nastaven na 1 000, jaká bude konečná koncentrace zředěného vzorku?
   • Použijte vzorec:
     • C_{závěrečný} = C_{počáteční}/ A
     • C_{závěrečný} = 1 000 000/1 000
     • C_{závěrečný} = 1 000 buněk / ml

3. 
   

   
   Věnujte pozornost použitým jednotkám. Při výpočtech vždy zkontrolujte, zda používáte stejné jednotky. Pokud tedy začnete s koncentrací buněk na ml, váš konečný výsledek bude také v buňkách na ml. Pokud je vaše počáteční koncentrace v ppm, bude vaše konečná koncentrace v ppm.